摘要
选择2015年1月－2017年12月在该院接受ESD的老年胃癌患者，收集早期胃癌组织并检测miR-93、PTEN和TIMP2的表达量，随访术后复发情况；另取同期经病理证实为正常胃黏膜的组织作为对照，检测miR-93、PTEN和TIMP2的表达量。
早期胃癌组织中miR-93的表达量高于正常胃黏膜组织，PTEN和TIMP2的表达量低于正常胃黏膜组织（P < 0.05），且miR-93的表达量与PTEN和TIMP2的表达量呈负相关，T2期、低分化和未分化、黏膜下浸润、发生复发的早期胃癌组织中miR-93的表达量高于T1期、中分化和高分化、黏膜内浸润、未复发的早期胃癌组织，PTEN、TIMP2的表达量明显低于T1期、中分化和高分化、黏膜内浸润、未复发的早期胃癌组织（P < 0.05）；黏膜下浸润、miR-93表达增多、PTEN及TIMP2表达减少是早期胃癌患者术后复发的危险因素；miR-93高表达的早期胃癌患者未复发率低于miR-93低表达患者；miR-93预测早期胃癌复发的最佳截点为0.72。
胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一，随着胃镜检查的普及，早期胃癌的检出率有所提高，在胃癌局限于黏膜或黏膜下层的早期阶段进行治疗，能够明显改善预后，5年生存率可超过90.0%。内镜黏膜下剥离术（endoscopic submucosal dissection，ESD）是近年发展起来的治疗手段，可以一次性大块、完整的切除直径2 cm以上的黏膜病变，用于早期胃癌的治疗能取得组织学治愈性切除，远期疗效理
微小RNA（micro RNAs，miRs）是在转录后水平调节基因表达的非编码小分子RNA，具有广泛的生物学效应，与多种恶性肿瘤的发生有着密切关系。相关临床研
选择2015年1月－2017年12月本院确诊为早期胃癌的老年患者268例。其中，男139例，女129例，年龄61～70岁，平均（62.82±12.95）岁。另取同期在本院接受胃镜下胃黏膜活检、经病理证实为正常胃黏膜、且一般资料匹配的受试者95例作为对照组。其中，男55例，女40例，年龄60～67岁，平均（63.34±12.19）岁。早期胃癌患者和正常胃黏膜受试者一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。纳入标准：①接受ESD治疗；②术后病理学检查诊断为胃癌；③TNM分期为T1-2N0期；④年龄 ≥ 60岁；临床病理资料完整；⑤随访资料完整。排除标准：①术前接受过放化疗；②术后接受放化疗；③既往有其他恶性肿瘤病史；④随访过程中发生失访。
miRNA提取分离试剂盒、miRNA cDNA第一链合成试剂盒、miRNA荧光定量检测试盒购自天根生化科技（北京）有限公司，RIPA裂解液购自上海碧云天公司，兔单克隆PTEN和TIMP2一抗购自Abcam公司。荧光定量PCR仪为Bio-Rad公司，凝胶成像仪为上海勤翔科学仪器公司。
取早期胃癌组织和正常胃黏膜组织，使用miRNA提取分离试剂盒提取组织样本中的miRNA。使用miRNA cDNA第一链合成试剂盒配置反转录体系，将miR反转录为cDNA；miRNA荧光定量检测试剂盒配置荧光定量PCR体系：cDNA 2 μL、混合液10.0 μL、10 μmol/L上游引物0.6 μL、10 μmol/L通用下游引物0.6 μL、去离子水6.8 μL，在PCR仪上按照95℃预变性，3 min后按95℃ 5 s、60℃ 15 s的程序反应40个循环，根据循环曲线计算miR-93的表达量。
所有早期胃癌患者在术后3个月内每个月复查1次，术后3～12个月则每3个月复查1次，1年后每6个月复查1次，复查项目包括血常规、生化和胃镜等。随访截止日期2019年10月31日，记录患者的复发情况。
与正常胃黏膜组织比较，早期胃癌组织中miR-93的表达量明显增加，PTEN和TIMP2的表达量明显减少，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见
图1 早期胃癌组织和正常胃黏膜组织中PTEN和TIMP2的蛋白条带
Fig.1 Protein bands of PTEN and TIMP2 in early gastric cancer and normal gastric mucosa tissue
1～3为正常胃黏膜组织，4～6为早期胃癌组织
不同性别、年龄患者的早期胃癌组织中miR-93、PTEN和TIMP2表达量比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）；T2期、低分化和未分化、黏膜下早期胃癌组织中miR-93的表达量高于T1期、中分化和高分化、黏膜内早期胃癌组织，PTEN和TIMP2的表达量明显低于T1期、中分化和高分化、黏膜内早期胃癌组织，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见
与未复发患者比较，复发患者早期胃癌组织中miR-93的表达量明显增加，PTEN和TIMP2表达量明显减少，两者比较，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见
以是否复发为应变量，性别、年龄、T分期、分化程度、浸润深度、miR-93、PTEN和TIMP2为自变量，进行COX回归分析，结果显示：黏膜下浸润、miR-93表达增多、PTEN及TIMP2表达减少是早期胃癌患者术后复发的危险因素。见
根据早期胃癌组织中miR-93表达量的中位数分为miR-93低表达和高表达，绘制未复发的Kaplan-Meier曲线，与miR-93低表达患者比较，miR-93高表达患者的未复发率较低（P < 0.05）；绘制miR-93表达量预测早期胃癌患者复发的ROC曲线，曲线下面积为0.7015（95%CI：0.583～0.820），根据约登指数最大值确定最佳截点为0.72，灵敏度和特异度分别为66.02%和66.67%。见
图2 早期胃癌患者术后复发的Kaplan-Meier曲线
Fig.2 Kaplan-Meier curve of postoperative recurrence in patients with early gastric cancer
miR-93靶向PTEN基因为mRNA 3’UTR序列的第272-278碱基，靶向TIMP2基因为mRNA 3’UTR序列的第1 961-1 967碱基。见
图3 miR-93预测早期胃癌患者术后复发的ROC曲线
Fig.3 ROC curve of miR-93 in predicting postoperative recurrence of patients with early gastric cancer
图4 miR-93靶向PTEN和TIMP2的生物信息学分析
Fig.4 Bioinformatics analysis of miR-93 targeting PTEN and TIMP2
ESD在早期胃癌的治疗中表现出积极价值，具有创伤小、组织学切除彻底等优势，但仍有部分患者发生术后复发，造成预后不良。因此，筛选可能发生术后复发的高危早期胃癌患者，并尽早在术后进行辅助治疗和靶向治疗，具有积极的临床意义。miR-93是一种具有促癌作用的miRNA，在包括胃癌在内的多种消化道恶性肿瘤中均呈高表达趋
miR-93的促癌作用包括促进癌细胞增殖、迁移和侵袭，胃癌细胞中的PTEN和TIMP2已经被证实受到miR-93调
已有研
miR-93的促癌作用被广泛证实，可能在癌细胞恶性生物学行为中处于上游调控地位，通过调控下游包括PTEN、TIMP2在内的多种靶基因来增强癌细胞恶性生物学行为。因此，miR-93表达的改变，可以通过复杂的下游机制来造成早期胃癌的发生发展，同时也影响远期预后，造成局部复发。在COX回归模型验证了miR-93表达增加与早期胃癌术后复发的关系后，本研究还通过Kaplan-Meier曲线及ROC曲线分析了miR-93预测复发的价值，结果显示，miR-93高表达的早期胃癌患者术后复发率更高，且miR-93的表达对早期胃癌术后复发具有预测价值。因此，miR-93的表达可能成为预测早期胃癌术后复发、筛查早期胃癌术后复发高危人群的标志物，也可能成为治疗早期胃癌、预防复发的治疗靶点。
综上所述，早期胃癌中miR-93表达增多与病理特征恶化、抑癌基因PTEN及TIMP2表达减少以及ESD术后复发有关；miR-93高表达是早期胃癌患者ESD术后复发的危险因素，对术后复发具有预测价值，靶向抑癌基因PTEN和TIMP2是其可能的生物学作用。本研究的不足之处是随访时间较短，今后将进一步延长随访时间，并深入挖掘miR-93在早期胃癌发生发展中的作用及可能机制。
（吴静 编辑）
本文引用格式：杨洁, 彭志红, 吴宏博. miR-93表达与内镜黏膜下剥离术治疗老年早期胃癌预后的关系及其靶向抑癌基因的生物信息学分析[J]. 中国内镜杂志, 2020, 26(9):11-18.
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